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PCR反應詳細基本步驟

更新時間：2024-06-20      瀏覽次數：1057

聚合酶鏈反應技術（Polymerase chain raction ,PCR）是一種在體外擴增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍。PCR反應基本步驟：


1、變性：根據DNA高溫變性的原理，將反應體系溫度升至變性溫度（高于模板熔點，約95℃），使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板（單鏈）。[95℃，30s]


2、退火：將反應體系溫度驟降至退火溫度（低于引物熔點約55℃），是PCR引物與PCR模板3’端雜交，稱為退火。[55~65℃，30s]


3、延伸：將反應體系溫度升至延伸溫度（約72℃），DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈，使目的DNA拷貝數增加1倍。[72℃，30~60s]


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