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      關(guān)于細(xì)胞為什么會(huì)衰老,怎么可以檢測(cè)出來(lái)

      更新時(shí)間:2024-03-04      瀏覽次數(shù):768

      ◆細(xì)胞為什么會(huì)衰老:

      1、過(guò)量的大分子交聯(lián)是衰老的一個(gè)主要因素,如DNA交聯(lián)和膠原膠聯(lián)均可損害其功能,引起衰老。

      2、細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累至—定量后會(huì)危害細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞的衰老。

      3、自由基含有未配對(duì)電子,具有高度反應(yīng)活性,可引發(fā)鏈?zhǔn)阶杂苫磻?yīng),引起DNA、蛋白質(zhì)和脂類,尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質(zhì)變性和交聯(lián),損傷DNA、生物膜和重要的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白,從而引起衰老各種現(xiàn)象的發(fā)生。

      4、存在于細(xì)胞內(nèi)部提供能量的線粒體,其遺傳基因很容易發(fā)生突變,變異的積累很可能是人體老化的原因之—。

      細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。怎么可以檢測(cè)出來(lái)細(xì)胞衰老呢?按照以下檢測(cè)方法步驟操作可以檢測(cè)出細(xì)胞衰老:

      ◆細(xì)胞衰老檢測(cè)方法與步驟:

      (1)細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片,每孔加入1×10E5個(gè)細(xì)胞,37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過(guò)夜,使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長(zhǎng)。

      (2)在超凈工作臺(tái)中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,加入×1 PBS,洗滌細(xì)胞1次,隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,室溫條件下固定3~5分鐘。

      (3)吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,加入×1 PBS,洗滌細(xì)胞3次,每次3分鐘。

      (4)吸棄×1 PBS,加X(jué)-Gal溶液以浸沒(méi)細(xì)胞片為宜,37℃孵育4~8小時(shí)或過(guò)夜,用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。

      (5)取出細(xì)胞爬片,去離子水沖洗2次,再次用固定液固定4分鐘,流水輕輕沖洗。

      (6)將細(xì)胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I(xiàn)(2分鐘)→95%酒精Ⅱ(2分鐘)→100%酒精I(xiàn)(2分鐘)→100%酒精I(xiàn)(5分鐘)→二甲苯I(2分鐘)→二甲苯Ⅱ(2分鐘)。

      (7)中性樹(shù)膠封片。

      (8)在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細(xì)胞形態(tài)。

      每張片子鏡下計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞,確定X-Gal染色陽(yáng)性細(xì)胞(衰老細(xì)胞)在細(xì)胞群體中的所占的百分比即衰老細(xì)胞率(藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/總計(jì)細(xì)胞數(shù)×100%)。

      ◆細(xì)胞衰老檢測(cè)注意事項(xiàng):

      ①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。

      ②細(xì)胞固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或固定之后清洗不干凈,均會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)。

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